Fluorescence d'orientation chromosomique in situ hybridization (CO-FISH)

CO-FISH, ou fluorescence in situ spécifique au brin hybridization, facilite le ciblage spécifique au brin de DNA avec des sondes marquées par fluorescence. Il exploite l'orientation uniforme des principaux satellites par rapport à la direction des télomères, permettant inévitablement aux brins d'être désignés sans ambiguïté comme brins "Watson" ou "Crick". En utilisant des sondes unidirectionnelles qui distinguent les principales régions satellites, couplées à des colorants marqués par fluorescence, des brins individuels peuvent être liés. Pour garantir que seul le brin matrice est marqué, les brins nouvellement formés doivent être dégradés par incorporation de BrdU et photolyse. Ce protocole offre une résolution cytogénétique améliorée, permettant aux chercheurs d'observer des brins simples par opposition à des chromatides entières avec des expériences de poursuite d'impulsions. De plus, la ségrégation non aléatoire des chromatides peut être directement analysée en ciblant les principaux marqueurs satellites.

Image 261A | RNA Flux de travail de séquençage à cellule unique RNA | Yijyechern / Attribution-Share Alike 3.0 Unported | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:RNA-Seq_workflow-5.pdf) from Wikimedia Commons

Auteur : Yavor Mendel

Références:

Techniques de biologie moléculaire II

Outils de biologie moléculaire VI