Dans cet exemple, un gène de la bibliothèque de gènes de mammifères sera sous-cloné dans un plasmide bactérien (plateforme de destination). Le plasmide bactérien est un morceau de DNA circulaire qui contient des éléments de régulation permettant aux bactéries de produire un produit génique (expression génique) s'il est placé au bon endroit dans le plasmide. Le site de production est flanqué de deux sites de coupure enzymatique de limitation "A" et "B" avec des extrémités collantes incompatibles.
Le mammifère DNA ne vient pas avec ces sites de limitation, ils sont donc intégrés par extension de chevauchement PCR. Les amorces sont conçues pour placer les sites de limitation avec soin, de sorte que le codage de la protéine est dans le cadre, et un minimum d'acides aminés supplémentaires est implanté de chaque côté de la protéine.
Le produit PCR contenant le gène de mammifère avec les nouveaux sites de limitation et le plasmide de destination sont soumis à une digestion de limitation, et les produits de digestion sont purifiés par gel electrophoresis .
Image 274A | Cette image montre le déroulement de subcloning comme indiqué à gauche. | Le téléchargeur original était Takometer sur Wikipedia anglais. / Attribution 2.5 Generic | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Subcloning.png) from Wikimedia Commons
Auteur : Yavor Mendel
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